بررسی کاربرد هورمون LHRH-A2 در تکثیر مصنوعی تاسماهی ایرانی (قره برون)(Acipenser persicus)

واضح آرشیو وب فارسی:فان پاتوق: چكيده:
در طی دهه های گذشته تعداد کافی ماهی بالغ جهت استحصال غده هيپوفيز و كاربرد آن براي تکثير مصنوعی ماهيان خاوياری در دسترس بود . با کاهش شديد صيد در سالهای اخير ، ميزان غده هيپوفيز استحصالي نيز كاهش يافت.لذا در اين تحقيق هورمون LHRH-A2 در دوزهای مختلف جهت تکثير مصنوعی تاسماهی ايرانی مورد استفاده قرار گرفت.مولدين طبق روشهاي رايج از لحاظ ظاهري و رسيدگي جنسي مورد بررسي قرار گرفته و در نهايت71 قطعه مولد ماده تاسماهی ايرانی داراي رسيدگي مناسب با دوزهای 5/3-، 7-،- 8 و 10 ميکروگرم به ازای هر کيلوگرم وزن بدن ماهيان مولد ماده ، مورد تزريق قرار گرفتند .
نتايج نشان داد، كاربرد هورمون LHRH-A2 در دوز هاي فوق ميتواند منجر به رسيدگي نهايي و اوولاسيون مولدين شود. بررسی و تحليل نتايج بدست آمده نشان می دهد که با توجه به کاهش تعداد ماهی صيد شده برای استحصال غده هيپوفيزاز يكطرف و كاربرد آسان و كارايي بالاي هورمونLHRH-A2 ، می توان از آن به عنوان يک جايگزين مناسب برای غده هيپوفيز در تکثير مصنوعی تاسماهی ايرانی مورد استفاده قرار داد.
واژه گان كليدي : تاسماهي ايراني ، هورمون LHRH-A2 و تكثير مصنوعي.
Study on the application of LHRH-A2 hormone on the artificial propagation of Persian sturgeon (Acipenser persicus)
R. M. Nazari1
• ,1* Mazandaran, Sari, Rajae sturjeon fish farm
• PO box: 833 mail: [email protected]
Abstract
During last decades, stocks of sturgeons were proper and there were enough adult fishes for obtaining of pituitary gland. But during recent years their stocks decreased sharply, so fish farms cannot obtain proper number of pituitary gland, so they had to find an alternation and solve problem.
Result of this study, represents application of LHRH-A2 (Luteinizans Hormonum Releasans Hormonum A2 (LHRH-A2) Pro Injection) as an alternative of pituitary gland in artificial propagation of Persian sturgeon.Results showed that LHRH-A2 induced final maturation and ovulation in dosages of 3.5, 7, 8 and 10 µg/kg of body weight of females, successfully.
Finally concluded that LHRH-A2 is proper alternation for pituitary gland in artificial propagation of Persian sturgeon.
Key words: Persian sturgeon, LHRH-A2 , Artificial propagation
مقدمه
تکثیر و پرورش مصنوعی ماهیان خاویاری از سال 1351 به صورت اصولی در ایران آغاز و در طی این چهار دهه سالیانه میلیون ها قطعه بچه ماهی خاویاری در اوزان مختلف از طریق تکثیر مصنوعی در کارگاههای تکثیر و پرورش شهید بهشتی و سیاهکل رشت، شهید رجایی ساری و شهید مرجانی و سد وشمگیر گرگان، تولید و در رودخانه های منتهی به دریای مازندران، جهت حفظ و بازسازی ذخایر ماهیان خاویاری، رهاسازی گردیدند. تکثیر مصنوعی ماهیان، حلقه اول زنجیره تکثیر و پرورش مصنوعی ماهیان خاویاری بوده و از اهمیت قابل توجهی برخوردار می باشد.لازمه تكثير مصنوعي كاربرد مواد مناسب براي تحقق مناسب رسيدگي نهايي ، اولاسيون و تخم ريزي است.
كاربرد موفقيت آميز غده هيپوفيز در تكثير مصنوعي ماهيان بوسيله Houssay در سال 1930 ابداع شد (Mikolajczyk و همكاران 2003 ؛ and Mylonas Zohar 2001 ) و تا سال 1971 تنها روش و تكنيك در تكثير مصنوعي ماهيان بود. بعد ها بوسيله محققين متعددي از جمله Hasler (1940)، Migita ( 1952) ، Ball (1954) ، Fontenele (1955) و ...... ادامه و روش ها بهبود يافت(Mikolajczyk و همكاران 2003 ؛ and Mylonas Zohar 2001 ).
ولي به علت معايب كاربردغده هيپوفيز يعني : 1) اختلاف زياد در مقدار گنادوتروپين موجود در غده هاي هيپوفيز ماهيان متفاوت و زمانهاي مختلف. 2) وجود هورمونهاي اضافي غير ضروري برا ي تكثير مصنوعي در غده هيپوفيز . 3) احتمال انتقال بيماري ها.4) محدوديت زماني درتهيه . 5 )مشكلات استحصال غدد ، جداسازي بافت اطراف غددبوسيله دست .6) كاهش ارزش تجاري ماهي بعدازاستحصال غده هيپوفيز.7) هزينه بالاي تزريق هيپوفيز در مقايسه با هورمون ، محققين را وا داشت كه بدنبال جايگزين باشند اين تحول بوسيله تحقيقات Breton و همكاران ( 1973) با كاربرد موا د هيپوتا لاموسي براي ترشح گنادوتروپين در ماهي كپور معمولي تحقق يافت وكشف GnRH توسط Guillemin (1978 ( وسنتز انالوگهاي آن وكشف نقش بازدارند گي دوپامين توسط Peter و همكاران ( 1980 ) و برطرف نمودن ايـن بازدارندگي توسط Chang و همكاران (1984 ) منجـر به تحولات بزرگتر درتكثير مصنوعـي ماهيان گرديد ( Mikolajczyk و همكاران 2003 ).
در ماهيان خاوياري مهمترين قدم را گيربيلسكي و همكارانش برداشتند آنها با تزريق غده هيپوفيز ، ماهيان خاوياري را به مرحله اوولاسيون رساندند (Billard و Chebanov 2001 ).
در طی دهه های گذشته، بعلت مناسب بودن آمار صید (بيش از 3000 تن در سال در ايران )، تعداد کافی ماهی بالغ جهت استحصال غده هیپوفیز و كاربرد آن برای تکثیر مصنوعی ماهیان خاویاری در دسترس بود. ولی در سالهای اخیر با کاهش شدید و تصاعدی صید ماهیان خاویاری، میزان غده هیپوفیز استحصال شده، نیاز مراکز تکثیر مصنوعی ماهیان خاویاری را تامین نکرده ، لذا، همانند سایر ماهيان استفاده از انواع هورمون های سنتتیک به عنوان جایگزین غده هیپوفیز، در تکثیر مصنوعی ماهیان خاویاری رایج گردیده است (Goncharovوهمکاران (1991) ، Savelyeva و Chebanov ( 1999)، بهمنی و همکاران 1381).
هورمون Luteinizans Hormonum Releasans Hormonum A2(LHRH-A2) ProInjection یکی از هورمون هایی است که در آسیای جنوب شرقی برای القاء رسیدگی نهایی، اوولاسیون و تکثیر مصنوعی کپورماهیان چینی مورد استفاده قرار می گیرد.با توجه به كمبود غده هيپوفيز در بررسی حاضر، كارايي هورمون LHRH-A2 در دوزهای مختلف در تکثیر مصنوعی تاسماهی ایرانی مورد آزمايش قرار گرفت.
مواد و روش كار
1 - مواد
تعداد 71 قطعه ماهي ماده و 22 قطعه ماهي نر صيد شده تاسماهي ايراني ( قره برون ) در طي زمستان1385 و بهار سال 1386 از سواحل جنوب شرقي درياي خزر در محدوده صيدگاههاي خزرآباد ، گهرباران ، اميرآباد ، تازه آباد و ميان قلعه، جهت بررسي انتخاب گرديدند. جهت القاء رسيدگي نهايي و اولاسيون از غده هيپوفيز تاسماهي و هورمون LHRH-A2 با ویالهای 100 میکروگرم كه در آسياي جنوب شرقي در تكثير مصنوعي كپورماهيان كاربرد دارد استفاده شد و براي انكوباسيون تخم ها از انكوباتور يوش چنكو و به منظور تعيين بازماندگي لارو از ظروف پلاستيكي 1/0 متر مربعي و جهت تغذيه اوليه لاروها از ناپليوس آرتمياي اروميه استفاده و تخم ها در فرمالين 10% تثبيت گرديد.
2 - روش كار
2 – 1 - تكثير مصنوعي
در فصل تکثیر 20 قطعه ماهيان مولد قره برون مناسب و در مرحله چهارم رسيدگي جنسي با دز 45 تا50 ميلی گرم غده هيپوفيز در يك مرحله در عضلات پشتي مورد تزريق قرار گرفتند كه از اين تعداد 19 قطعه به مرحله اولاسيون رسيده وعملكرد 8 قطعه ماهيان مولد مورد مطالعه قرار گرفت . 51 قطعه مولد ماده قره برون مناسب و در مرحله چهارم رسيدگي جنسي و با وزن 26 الی 34 کیلوگرم با دوزهای 3.5-- 7-- 8 و 10 میکروگرم به ازای هر کیلوگرم وزن بدن، با هورمون LHRH-A2 ، در دو مرحله و در عضلات پشتي مورد تزریق قرار گرفتند . كيفيت و كميت و تحرك اسپرم ماهيان نيز طبق روشهاي رايج ارزيابي ) Dettlaff و همكاران 1993) و دمای آب در طی آزمایش بین 17 تا 20 درجه سانتی گراد متغیر بود.
2 – 2 - تعيين درصد لقاح و تلفات انكوباسيون
تخمهاي لقاح يافته جهت انكوباسيون در داخل انكوباتور يوش چنكو قرار داده شده و پس از حدود 3 ساعت (در حرارت 17-20 درجه سانتيگراد) در زمان ظهور آثار دومين تقسيم ميتوزي در سطح قطب حيواني ،مقداري از تخمها بصورت تصادفي برداشته(150-200 عدد تخم) و بوسيله فرمالين10% تثبيت ودرصد لقاح به روش توصيه شده توسط Dettlaff و همكاران ( 1993) تعيين گرديد.در اين روش در مرحله تقسيم دوم ميتوز ,فقط تخمهای دارای چهار سلول به عنوان تخم طبيعی(تخمک لقاح يافته با يک اسپرماتو زوئيد) محاسبه و بقيه شامل :تخم های پلی اسپرمی ,تحريک شده ,تحريک نشده وپاره ,به عنوان تخم غير طبيعی محسوب شده و درصد لقاح تعيين گرديد. پس از آن مقدار مشخصي از تخمهاي لقاح يافته (150-200 عدد تخم) هر مولد ماده تكثير شده, برداشت و در انكوباتور جداگانه اي نگهداري و پس از خروج لارو از تخم، درصد تلفات و بازماندگي مرحله انكوباسيون تعيين گرديد.
2 – 3 - تعيين درصد بازماندگي لاروها
بعد از آغاز خروج لاروها تعداد 300 قطعه از لاروهاي هر مولد به صورت جداگانه شمارش و در ظروف پلاستيكي خاص طراحي شده به همين منظور ، نگهداري و درصد بازماندگي دوره اوليه پرورش که در حرارت 17 تا20 درجه حدود 10 روزطول می کشد, (مرحله جذب كيسه زرده ) تعيين گرديد . پس از شروع تغذيه خارجي ، لاروها به مقدار مساوي با استفاده از نائوپليوس آرتميا ( با تناسب 30% بيومس) تغذيه و درصد بازماندگي مرحله تغذيه آغازين آنها نيز تعيين گرديد.
2 – 4 - بررسي هاي آماري
آناليز و تحليل واريانس داده ها با استفاده ازآناليز واريانس يكطرفه One way ANOVA انجام شد . مقايسه ميانگين ها با استفاده از آزمون Duncan درسطح اعتماد 95% انجام و مقادير P<0.05 معني دار تلقي گرديد .
نــتــايــج
تحقيقات نشان داد كاربرد هورمون LHRH-A2 در دوزهاي 5/3 ، 7 و 8 ميكروگرم در ازاي كيلوگرم وزن مولد منجر به جوابدهي 100 درصد مولدين تزريق شده، گرديد و دردوز 10 ميكروگرم در ازاي كيلوگرم وزن مولد منجر به جوابدهي 80 درصد مولدين تزريق شده و تزريق غده هيپوفيزمنجربه جوابدهي 95 درصد مولدين تزريق شده گرديده است كه اختلاف معني داري با هم نداشتند( P>0.05 ).
از لحاظ درصد لقاح، ميانگين درصد لقاح براي تيمار غده هيپوفيز 1 0/70 درصد وبراي هورمون در دوزهاي 10،8 ، 7 و5/3 ميكروگرم در كيلو گرم وزن بدن ماهي مولد به ترتيب 67 /69، 64/67 ، 96/70 و 72درصدبود ،كه بالاترين مقدار درصد لقاح متعلق به تيمــار5/3 ميكروگرم هورمون در ازاي كيلوگرم وزن مولد و پايين ترين مقدار درصد لقاح متعلق به تيمار 8 ميكروگرم هورمون در ازاي كيلوگرم وزن مولد بود ولي اختلاف معني داري بــا هــم نـد اشتند ( P>0.05 ).
از لحاظ درصد بازماندگي دوره انكوباسيون ميانگين درصد بازماندگي براي تيمار غده هيپوفيز 93/65 درصد وبراي هورمون در دوزهاي 10 ، 8 ، 7 و5/3 ميكروگرم در كيلو گرم وزن بدن ماهي مولد به ترتيب 03/64 ، 1/67 ،03/72 و 77/63 درصد بود كه بالاترين مقدار درصد بازماندگي دوره انكوباسيون متعلق به تيمار7 ميكروگرم هورمون و پايين ترين مقدار به تيمار 5/3 ميكروگرم هورمون بود ولي اختلاف معني داري باهم نداشتند( P>0.05 ).

این صفحه را در گوگل محبوب کنید

[ارسال شده از: فان پاتوق]

[مشاهده در: www.funpatogh.com]

[تعداد بازديد از اين مطلب: 1668]